单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于免疫抗体鱼类特情人、寡核苷酸装饰制造费比较高或的操作的流程繁琐。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯副教授精英团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个成本低的投入、跨动物群、全机构兼容的全新解决方案。

期刊论文详细资料

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由我国现代内地学科有效院隔代基因遗传规律的的与发肓微植物学探讨所和我国现代内地隔代基因遗传规律的的针灸学会承办的国际上科研中文核心杂志杂志杂志，倾力于简讯生命图片学科有效和医学专业隔代基因遗传规律的的学行业的原创网性探讨技术成果。JGG 2021年度引响因素7.1，Scopus科研中文核心杂志杂志杂志点评统计指标CiteScore 9.9，排名第JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY行业Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY行业Q1区，排名第我国现代内地学科有效院中文核心杂志杂志杂志区域微植物学小类1区(Top中文核心杂志杂志杂志)，隔代基因遗传规律的的学和生化学与碳原子微植物学小类双1区。

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些有什么用HEATag

完美的“二融合”设计的

HEATag是由凝集素和HUH内切酶组合的凝固球蛋白

「位置定位器」模块图片 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化绘制（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「连入器」功能 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）检索长形码实行共价对接。

“1+1>2”的的效果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样本量标志与产品追溯。

Fig1: HEATag多大标注基本原理示图图

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实战技巧产品检验

HEATag究竟 有大多能打？

应该在的不同生活条件下，完成母乳喂奶生物内部系单内部混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究方案项目团队为 HEATag 如何设置了多轮 “压检测”，从血肿瘤细胞系到血肿瘤细胞质，从常温到常温，从新鲜样板到加固样板，全周边所有地方验证通过它的不靠谱性和不靠谱性。

第一名轮测试仪对应辅乳期生物細胞系：科研人群挑选了出自人、鼠、仓鼠4个鱼类的三种細胞（HEK293T、K562、MEF、CHO），在在常温下要 HEATag 图标后搭配测序。结果二手回收的 11447 个細胞中，85.66% 都能进行 HEATag 方形码确切匹配好到原鱼类，范例间交错感染极低，UMAP 聚类解析法解析更简单发现，HEATag 方形码与鱼类炎症因子聊天基因组组表现形式高宽比一样的。 然后，测试图片因素进这一步强制升级：理论研究员试着在 4℃下标志新的组织受损肿瘤细胞膜膜、在高温下标志甲醇调整组织受损肿瘤细胞膜膜，虽然一直标志组织受损肿瘤细胞膜膜核。结论但仍旧优异：全部因素下，模本标签设计与种类涉及到的信息均拥有很好的的涉及到的性，分割最准确度超 95%。就算甲醇调整会促使偶尔的转录本交叉重合空气污染，组织受损肿瘤细胞膜膜核化学合成就有一少部分 RNA 外流，组织受损肿瘤细胞膜膜多种类型的注音结论但仍旧与新的模本稳定同一，验证 HEATag 能够 标志其他清理因素下的实验操作模本。

Fig2: HEATag 可在不一样因素下完整单神经元转录组混样分析一下

可记号喂母乳猎物和海洋生物无脊椎神经猎物的原代细胞核

如若说神经元系测试测试是 “核心题”，那策划 子样表即使 “增添题”， 这么多子样表或许因神经元种类非常复杂、自然环境适应能力性非常规，作为标注的技术的 “疑难问题”，而 HEATag 正好在这么多 “疑难问题” 上展露了优劣势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸团队，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不只是能被准确性分辨，大多数主要是神经元方式的聚类分析导致都清析可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋环境生物技术的匹配性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条型码与种群转录组体现了较高高度性，并没有显现因高盐坏境导至的 “标上报废”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可体现喂奶爬行动物组建模板多个 scRNA-seq 了解

Fig4: HEATag可保证新颖浅海无脊椎骨各种动物多沉 scRNA-seq 解析

HEATag与肿瘤细胞的综合不所致转录组的更为明显提升

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在结束标签工作任务的另外，会对下一步的转录多组分析导致的打扰，做到了研究方案的数据的真人性。

Fig5: HEATag不的影响样表的 RNA 展现模式，

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的前景可期

HEATag 能为单細胞设计介绍啥子？

HEATag 的商业价值，远不断于 “解决处理标上话题”，它的便捷性和普遍意义，也正在为单癌细胞调查开放大多也许性

从利用情境去看

HEATag 能涵盖从 “简易比效浅析”（如癌组建与正确组建、中成药补救与照表）到 “大人数的探讨”（如组建受损神经元图谱作图、高通芯片量选择）的全的范围供需。随着时间的推移 PIP-seq、Stereo-cell 等创新型可扩容技能的经济发展，HEATag 还能进每一步不断提升单受损神经元的探讨的通量，四轮驱动研究开发团队推进挺大人数的创业项目。

从跨领域行业提升空间看到

HEATag 不只是不适用到转录组学，还能与表观遗传基因组学、氨基酸质组学、区域组学等技能性按照，按照定制网站指数和寡核苷酸编码序列，HEATag 就能够轻松愉快融进了 不一样的组学方案，不直接影响移动信号采集宽度。时，通过HEATag还就能够发展壮大单受损细胞糖组学论述技能性。

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媒体合作动态数据

拜谱生物技术与陈凯客座教授实现目标大概加盟意愿

什么值得关心的是，在 HEATag 新枝术能够出比较大适用潜能的蓝本下，拜谱海洋资源生态学制品已与男方浮游海洋资源生态学科学的与市政工程前力实验报告英文室（广州市）陈凯教受达到目标基本配合相关。交易双方彼此项目刺激性讨论 HEATag 新枝术的产业发展化正式出台、研发有效的转化等趋势刺激性的深度通力合作，推动了这低投资成本、跨动物群的单生殖肿瘤细胞系记号新枝术迅速适用于实际效果研发场景中，为很多实验报告英文室带来高效性、经济能力的单生殖肿瘤细胞系科研课题方式，机械助力研发岗位者在生殖肿瘤细胞系海洋资源生态学制品学、浮游海洋资源生态学海洋资源生态学制品学、重大疾病机制化等领域行业作为很多超越